摘  要：采用一種與人體胃生理學環境相接近的體外模擬試驗條件提取中藥化學成分。以人參超微粉為原料，分別以仿生溶媒及水作為提取溶劑，置37℃水浴中，攪拌提取1小時，經正丁醇萃取分離，得人參皂苷類成分。采用高效液相色譜法，測定二種提取物中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量之和，并分析高效液相色譜圖特征，結果仿生化提取物中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量之和高于水提取物，并且仿生化提取物色譜圖中顯示有新成分產生。
關鍵詞：人參皂苷； 仿生化；提取； 高效液相色譜法
    人參為五加科植物人參Panax  ginseng  C. A. Meyer.的干燥根及根莖，人參皂苷為人參主要成分之一。傳統溶劑法以水、乙醇等親水性溶劑作為提取溶劑，采用煎煮法、滲漉法、回流提取法等方法進行提取，近年來許多新的提取技術用于人參皂苷提取，如超聲提取法、微波提取法、超臨界二氧化碳提取法及超高壓提取法等[1][2]。上述提取方法的原理主要基于化學浸提的“相似者相溶”原則而進行的，提取溶劑、條件與人體消化系統的生理條件有很大差別，因此得到的“有效成分或部位”存在體外有效，但進入體內卻無效的現象，而有些在體外無效的成分卻被作為雜質棄去或根本沒有從中藥中提取出來，但這些成分可能在體內胃腸液作用下發生轉化或代謝，而其轉化的成分或代謝產物具有良好活性，而且易于被吸收入血發揮作用，因此傳統方法篩選有效成分的效率很低，浪費巨大。基于口服藥物的體內運轉過程，本研究提出仿生化提取構想，即建立一種與人體胃腸生理學環境相接近的胃腸道模擬法，提取條件較化學浸提法更接近人體真實的胃腸生理條件，提取溶劑依據胃液及腸液組成，人工配制成系列提取溶媒，提取溫度在37℃，攪拌動態提取。實際上國外在胃腸系統的體外模擬實驗已成為一種非常有效的評估污染物有效性的方法，目前國際上已有十余種胃腸模擬方法[3]。本次研究以人參超微粉為原料，分別以仿生溶媒和水為提取溶劑，以人參皂苷Rgl和人參皂苷Re含量之和為考察指標，提取人參皂苷類成分，為仿生化提取中藥化學成分可行性提供科學依據。
    一、材料與方法
    1.1 材料與試劑
    人參藥材采于吉林省撫松市，經長春中醫藥大學中藥鑒定室鑒定為五加科植物人參Panax Ginseng C. A. Mey. 的干燥根，粉碎成超微粉（300目），備用。人參皂苷Re對照品（批號110754-200822）、人參皂苷Rg1對照品（批號110703-200221），供含量測定用 購于中國藥品生物制品檢定所；胃蛋白酶（1:3000  上海源葉生物科技有限公司）；乙腈（美國Fisher,色譜純）；水為蒸餾水（實驗室自制）；其他試劑均為分析純。
    1.2 儀器
    島津LC-10AT高效液相色譜儀 ；檢測器：SPD-10 Av；三用紫外分析儀ZF-6（上海嘉鵬科技有限公司）；BMF-6超微粉碎機（濟南倍力粉工程有限公司）；飛鴿 LXJ-ⅡB低速大容量多管離心機（上海安亭科學儀器廠）；中興 DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業儀器有限公司）；KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；7321型電動攪拌機調速器（上海標本模型廠）。
    1.3 試驗方法
    1.3.1仿生化提取及水提取方法
    取人參藥材，60℃真空干燥，超微粉碎，過300目篩，備用。仿生提取溶媒由0.2%氯化鈉、0.32%胃蛋白酶及0.7%鹽酸配制成溶液。
    稱取人參超微粉4.0g，加入仿生溶媒100ml，置37℃水浴中，攪拌，提取1小時，離心，上清液用水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇液，減壓回收，低溫真空干燥，得人參仿生化提取物。
    稱取人參超微粉4.0g，加水100ml，置37℃水浴中，攪拌，提取1小時，離心，上清液用水飽和正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇液，減壓回收，低溫真空干燥，得人參水提取物。
    1.3.2 人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量測定方法[4]
    1）色譜條件  色譜柱：Zorbax XDB-C18(4.6mm×250mm，5m)；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液（20:80）；流速：1.0ml•min－1；檢測波長：203nm；柱溫：室溫。理論塔板數按人參皂苷Rg1峰計算不低于6000。
    2）對照品溶液制備  精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每1ml分別含人參皂苷Rg1 0.24mg、人參皂苷Re0.36mg的混合對照品溶液，搖勻，即得。
    3）標準曲線的制備
    分別精密吸取2l 、5l 、10l、15l、20l對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄其峰面積積分值，分別以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re濃度（g）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程：人參皂苷Rg1為Y=1323.7X-15395,r=0.9998；人參皂苷Re為Y=1659.4X+5200.8,r=0.9999。結果表明，人參皂苷Rg1在0.48～4.8g，人參皂苷Re在0.72～7.2g范圍內呈良好的線性關系。液相色譜圖見圖1。.
    二、結果與分析
    2.1 不同提取方法提取率的比較
    分別取人參皂苷仿生化提取物及水提取物適量，精密稱定，置容量瓶中，加甲醇超聲溶解，稀釋至刻度，制成每1mg/ml的溶液，搖勻，經微孔濾膜（0.45m）濾過，作為供試品溶液。分別精密吸取二種供試品溶液10l，注入液相色譜儀，依上法測定，得峰面積，外標一點法計算含量，并計算提取率。計算結果見表1，液相色譜圖見圖2、圖3。.
    2.2 結果分析
    含量測定結果表明，以人參皂苷Rg1與人參皂苷Re含量之和為指標，提取人參中皂苷類成分，仿生化提取法的提取率高于相同條件下以水作為提取溶劑；并且通過比較高效液相色譜圖，仿生法得到的提取物色譜圖在人參皂苷Rg1和人參皂苷Re前后分別出現新的色譜峰，提示在該提取條件下可能有成分轉化或是未被水提取出來的成分，對該成分的確定有待進一步研究。