材料與方法

1.材料

本試驗(yàn)中以花楸成熟種胚為外植體，種子采于黑龍江植物園的花楸成熟果實(shí)，調(diào)制后在4℃冰箱中貯存。將材料用自來水浸泡18h，然后用70%的酒精浸泡30s，再用2%的NaClO溶液攪拌消毒處理10min，然后在無菌工作臺上用無菌水沖洗5～7次，再用解剖刀切破種皮子葉端，剝出成熟胚待接種之用。

2.方法

1)不定芽的誘導(dǎo)：把成熟胚接種在附加了不同濃度的6-BA（6-芐基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）的MS和WPM固體培養(yǎng)基上。每組激素組合接種6瓶，每瓶接種5個(gè)種胚。觀察不定芽生長狀況，并在第20天開始統(tǒng)計(jì)不定芽誘導(dǎo)率。根據(jù)不定芽誘導(dǎo)率，選擇最佳培養(yǎng)基與激素組合。2)不定芽的增殖：觀察不定芽生長狀況，當(dāng)不定芽生長0.5cm時(shí)轉(zhuǎn)接到附加了不同質(zhì)量濃度的6-BA、IAA激素的MS增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。3)不定芽的生根：將增殖到長度1.0～1.5cm的不定芽接種到附加了不同質(zhì)量濃度的IBA或NAA的1/2MS培養(yǎng)基上，進(jìn)行生根培養(yǎng)。4)培養(yǎng)條件：采用日光燈照射進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照16h，黑暗8h，光強(qiáng)2000～3000lx，溫度(25±1)℃，濕度70%～80%。5)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：通過統(tǒng)計(jì)不定芽和生根的數(shù)量，分別計(jì)算出不定芽誘導(dǎo)率和生根率。不定芽誘導(dǎo)率＝（誘導(dǎo)出不定芽外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)）×100%；生根率＝（生根不定芽數(shù)/接入不定芽總數(shù)）×100%。

結(jié)果與分析

1.不同處理對花楸種胚不定芽誘導(dǎo)的影響

1)不同基本培養(yǎng)基對花楸種胚不定芽誘導(dǎo)的影響：將接種在MS和WPM培養(yǎng)基上的花楸成熟種胚培養(yǎng)7d后，胚芽膨大，3周后部分成熟胚胚芽處出現(xiàn)不定芽。1個(gè)月后，不同培養(yǎng)基中花楸成熟胚不定芽誘導(dǎo)率出現(xiàn)差異，誘導(dǎo)不定芽3周后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況。在MS培養(yǎng)基中，不定芽誘導(dǎo)率為80.33%；在WPM培養(yǎng)基中，不定芽誘導(dǎo)率為60.00%。經(jīng)過X2分析得出，MS和WPM培養(yǎng)基上產(chǎn)生的不定芽誘導(dǎo)率之間有顯著差異，即η＝4.02＞Xα＝3.84。結(jié)果指出MS培養(yǎng)基對不定芽的誘導(dǎo)效果優(yōu)于WPM培養(yǎng)基。

2)不同激素質(zhì)量濃度組合對花楸種胚不定芽誘導(dǎo)的影響：通過對激素質(zhì)量濃度組合篩選，本試驗(yàn)中選擇了不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA組合研究其對不定芽誘導(dǎo)的影響。將花楸成熟種胚培養(yǎng)12d后，觀察到生長很好的嫩綠不定芽，3周后部分不定芽長到1～2cm。1個(gè)月后，不同激素質(zhì)量濃度組合處理中花楸成熟胚不定芽的誘導(dǎo)率出現(xiàn)差異。由表2可以看出，在附加NAA0.5mg/L和6-BA0.5mg/L的MS培養(yǎng)基中，不定芽誘導(dǎo)率最高達(dá)80.33%，經(jīng)過X2分析得出，激素質(zhì)量濃度組合5與組合1、3、4、6、7、9之間芽誘導(dǎo)率均有顯著差異（X0.05=3.84），即η1-5=7.50＞X0.05、η3-5=6.20＞X0.05、η4-5=5.08＞X0.05、η5-6=6.20＞X0.05、η5-7=10.33＞X0.05、η5-9=5.08＞X0.05，而其它各組合之間的芽誘導(dǎo)率無顯著差異。在附加NAA1.0mg/L和6-BA0.5mg/L的WPM培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)率最高為60.00%，經(jīng)過X2分析得出，激素質(zhì)量濃度組合6與組合1、2、8、9，組合2與組合7之間芽誘導(dǎo)率均有顯著差異，即η1-6=5.45＞X0.05、η2-6=4.29＞X0.05、η5-8=4.29＞X0.05、η5-9=6.78＞X0.05，而其它各組合之間芽誘導(dǎo)率無顯著差異。

2.不同激素質(zhì)量濃度組合對花楸種胚不定芽增殖的影響

經(jīng)初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽，把不定芽轉(zhuǎn)接到附加了不同質(zhì)量濃度的6-BA、IAA的MS增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過2周可進(jìn)一步誘導(dǎo)增殖出5～13個(gè)不定芽，與初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽的情形相似。培養(yǎng)中，如激素6-BA質(zhì)量濃度過高會出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，在后期抑制根的生長。不同激素質(zhì)量濃度組合對不定芽增殖的影響見表3。從表3可以看出，不定芽增殖的最佳激素組合和質(zhì)量濃度為IAA0.5mg/L＋6-BA0.2mg/L。

3.不同質(zhì)量濃度的激素對花楸種胚不定芽生根的影響

待不定芽高1.0～1.5cm時(shí)，從基部剪下，移至生根培養(yǎng)基中，5d后芽基部陸續(xù)出現(xiàn)白色突起或愈傷組織，10～15d后可見發(fā)達(dá)的白色、黃綠色或紅色主根，1個(gè)月后大量須根產(chǎn)生，并形成發(fā)達(dá)的根系。激素IBA質(zhì)量濃度對生根數(shù)量的影響如表4所示。在1/2MS培養(yǎng)基中，IBA質(zhì)量濃度為0.2mg/L，根數(shù)量最大，不定根誘導(dǎo)率為70%，根長隨著IBA質(zhì)量濃度的逐漸增高而漸漸變短，當(dāng)IBA質(zhì)量濃度為0.2～0.3mg/L時(shí)，根長差別不大，然后根長逐漸變大，從根的生長狀態(tài)來看，添加IBA的處理中根粗壯，須根多，移栽容易成活。激素NAA質(zhì)量濃度對生根數(shù)量的影響如表4所示。在1/2MS培養(yǎng)基中，NAA質(zhì)量濃度為0.3mg/L，生根數(shù)量最大，不定根誘導(dǎo)率為50%，隨著NAA質(zhì)量濃度的逐漸變大，根的數(shù)量先增多后減少，當(dāng)NAA質(zhì)量濃度為0.2～0.3mg/L時(shí)，根長差別不大，然后根長逐漸變大，須根多，移栽容易成活。經(jīng)過X2分析得出，處理6與處理2、4、5、8，處理3與1之間的不定根誘導(dǎo)率有顯著差異，即η6-2=η6-5=η6-8=5.05＞X0.05、η6-4=7.5＞X0.05、η3-1=6.67＞X0.05，而其它處理間不定根誘導(dǎo)率無顯著差異。

結(jié)論與討論

（1）愈傷組織和不定芽誘導(dǎo)：建立高頻再生體系的基礎(chǔ)和關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)是愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)。高質(zhì)量的誘導(dǎo)組織是進(jìn)一步誘導(dǎo)分化和生根的前提和基礎(chǔ)[7-8]。本研究中得出，誘導(dǎo)花楸成熟種胚產(chǎn)生不定芽的適宜培養(yǎng)基為MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.5mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂6g/L，WPM＋6-BA0.5mg/L＋NAA1.0mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂6g/L，其成熟種胚不定芽誘導(dǎo)率分別為80.33%、60.00%。MS培養(yǎng)基的成熟種胚不定芽誘導(dǎo)率比WPM培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率高，誘導(dǎo)出的愈傷組織和不定芽質(zhì)量高，具有較大的繁殖潛力。誘導(dǎo)不定芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS＋6-BA0.2mg/L＋I(xiàn)AA0.5mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂6g/L，可誘導(dǎo)增殖出5～13個(gè)不定芽。

（2）生根培養(yǎng)：通過生根培養(yǎng)中激素種類和濃度的對比試驗(yàn)得出，生根培養(yǎng)效果最好的培養(yǎng)基是1/2MS＋I(xiàn)BA0.2mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂6g/L，成熟種胚不定芽生根率為70%。當(dāng)培養(yǎng)基是1/2MS＋NAA0.2mg/L＋蔗糖30g/L＋瓊脂6g/L時(shí)，成熟種胚不定芽生根率為50%。在生根培養(yǎng)試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，隨著IBA或NAA質(zhì)量濃度的增加，根變粗?？赡苁且?yàn)楫?dāng)IBA或NAA達(dá)到一定的質(zhì)量濃度后會抑制根的伸長生長，刺激根的增粗生長，增加根系的吸收面積，這有利于移栽成活率的提高。但是當(dāng)IBA或NAA的質(zhì)量濃度高于0.3mg/L時(shí)，根出現(xiàn)肉質(zhì)化，說明較高質(zhì)量濃度的IBA或NAA對生根有毒害作用，影響生根質(zhì)量，造成畸形根的形成，從而阻礙不定根的生長。所以IBA或NAA的質(zhì)量濃度對于不定根的生長發(fā)育具有較大的影響。及時(shí)轉(zhuǎn)瓶是誘導(dǎo)花楸生根培養(yǎng)過程中值得注意的問題。當(dāng)培養(yǎng)出不定芽翠綠發(fā)亮、根粗壯、根須發(fā)達(dá)的植株時(shí)，必須及時(shí)轉(zhuǎn)瓶到新鮮的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，否則將影響植株的生長。一些研究指出，可能是因?yàn)橥庵搀w在初代培養(yǎng)的過程中，由于本身的生物學(xué)特性和培養(yǎng)條件的影響，機(jī)體會分泌一些有毒的物質(zhì)，如果不及時(shí)轉(zhuǎn)瓶，滲透到培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)會影響培養(yǎng)物的生長和分化；這種狀況也可能是由于生長素在增殖培養(yǎng)基中殘留作用的影響。其原因有待進(jìn)一步深入研究。（本文圖、表略）

本文作者：包文泉 鄒薇薇 朝洛蒙 白玉娥 田有亮 何炎紅 單位：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院 赤峰天虹花卉市場