農(nóng)業(yè)論文代理苦蕎浸泡酒中總黃酮的測定

　　摘要：通過精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率等試驗評價了苦蕎及其制品中總黃酮常用的檢測方法，并探討應(yīng)用于苦蕎酒中總黃酮含量測定的可行性。同時，對影響苦蕎保健泡酒中黃酮含量的兩大因素(時間和固液比)進(jìn)行了單因素試驗，確定這兩種因素對提高黃酮在白酒中溶出率的較適宜范圍。結(jié)果表明，該方法應(yīng)用于苦蕎酒的檢測時有較好的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率，變異系數(shù)分別為3.30%、3.26%、1.81%、3.36%，說明該法同樣適用于苦蕎酒中總黃酮含量的測定，并采用此方法確定苦蕎浸泡酒(55%，V/V)最佳浸泡時間為10 d，最佳固液比為1∶20。

　　關(guān)鍵詞：苦蕎浸泡酒;總黃酮;溶出率

　　苦蕎麥?zhǔn)寝た剖w麥屬的植物，為我國特有的蕎麥品種，主產(chǎn)于大涼山2 000 m以上的高寒山區(qū)，是一種藥食兩用植物[1，2]。現(xiàn)代科學(xué)研究證明，苦蕎麥具有很高的營養(yǎng)價值，并含有其他谷物所不含有的黃酮類物質(zhì)，苦蕎黃酮具有降血脂、降血糖、抗氧化、抗癌等多種功效。隨著人們對苦蕎黃酮化合物研發(fā)的深入，其營養(yǎng)價值和藥用價值越來越受到關(guān)注[3，4]。黃酮在水中的溶解度較小，而在乙醇中有較高的溶解度，因此苦蕎保健酒，有效地提取了苦蕎的功能成分，具有較高的營養(yǎng)保健作用，是一種低度、高營養(yǎng)的保健品，經(jīng)常適量飲用苦蕎酒可防毛細(xì)血管的脆性和滲透性出血，預(yù)防糖尿病、高血脂、冠心病、風(fēng)濕病等，并且有強(qiáng)筋骨、健脾胃、祛風(fēng)濕、壯腎氣之功效[5-7]。

　　目前，苦蕎麥中總黃酮含量的測定通常采用中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)[8]，該標(biāo)準(zhǔn)采用分光光度法只針對蕎麥及其制品中的總黃酮含量的測定，未包括苦蕎浸泡酒中總黃酮含量測定。本研究綜合相關(guān)測定方法[9-12]應(yīng)用于苦蕎浸泡酒中黃酮含量的測定，通過精密度、穩(wěn)定性、添加回收率試驗，最終建立了苦蕎浸泡酒中總黃酮含量的測定方法，旨在為相關(guān)單位或企業(yè)在測定苦蕎泡酒總黃酮含量時提供參考。同時，對影響苦蕎浸泡酒黃酮含量的兩大因素，即時間和固液比進(jìn)行了單因素試驗，確定這兩種因素對提高苦蕎中黃酮在白酒中溶出率的較適宜范圍，為人們?nèi)粘Ｉ钪信葜瓶嗍w保健酒提供參考[13，14]。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 原料與試劑 航飛維苦蕎茶(西昌航飛苦蕎科技發(fā)展有限公司);野蕎神清香型白酒(55%，V/V; 西昌航飛苦蕎科技發(fā)展有限公司)。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)，甲醇、三氯化鋁、乙酸鉀均為分析純(國藥集團(tuán)上海試劑公司)。

　　1.1.2 儀器設(shè)備 電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京市永光醫(yī)療儀器廠);ESJ210-4B型電子天平(沈陽龍騰電子有限公司);722G型可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(北京市長風(fēng)儀器儀表公司)。

　　1.2 苦蕎泡酒中黃酮測定方法的評價

　　1.2.1 苦蕎泡酒的制備方法 稱取2.0 g的苦蕎茶，置于150 mL三角瓶中，加入白酒50 mL，常溫下放置10 d，過濾后的濾液即為苦蕎浸泡酒，設(shè)置3個重復(fù)。吸取1.0 mL浸泡酒置于10 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置30 min，待測。

　　1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法 用移液管吸取20 mg/mL 蘆丁標(biāo)液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分別置于 50 mL 容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1.0 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置30 min。同時作空白對照。標(biāo)準(zhǔn)曲線中蘆丁質(zhì)量濃度分別為0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mg/mL。在波長420 nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=0.006 4-0.001 5x(R2=0.997 9)。

　　1.2.3 總黃酮含量的測定方法 吸取苦蕎泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，1 mol/L 乙酸鉀溶液3 mL，用70%的甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，放置30 min，在420 nm處測定其吸光值。依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出總黃酮的濃度值。

　　1.2.4 苦蕎泡酒中總黃酮含量的計算方法 苦蕎酒中總黃酮含量以蘆丁的質(zhì)量計，稀釋倍數(shù)數(shù)值以V表示，按公式計算。

　　w= C·V/1000

　　式中，C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出的總黃酮濃度，mg/mL;V為總稀釋倍數(shù)。

　　1.2.5 精密度試驗 吸取浸泡酒1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，連續(xù)測定吸光度5次，計算出泡酒中黃酮含量。

　　1.2.6 穩(wěn)定性試驗 吸取浸泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min。分別在放置0、15、30、45、60、90 min時測定其吸光度，計算出泡酒中黃酮含量。

　　1.2.7 重現(xiàn)性試驗 分別吸取浸泡酒1.0 mL 5份，于10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，并計算出苦蕎酒中黃酮含量。

　　1.2.8 回收率試驗 分別吸取浸泡酒樣品1.0 mL 5份，置于10 mL容量瓶中，再準(zhǔn)確加入1 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 mg/mL)，同樣0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，70%甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，計算出浸泡酒中黃酮含量。